一、外植體的接種

外植體的接種是指把經過表面消毒處理的材料切割后轉接到培養(yǎng)基上的過程。此過程是在無菌條件下進行的主要包括：修剪切割和接種兩個過程。

（一）、修剪切割

1、莖段切割，一般來講莖段切割是將消毒完畢且經過無菌水沖洗的莖段外植體切割成1-2cm的小段（帶1-2個腋芽），同時將接觸過消毒劑部分的切口切除一定的組織，使其露出新鮮的沒有經過消毒劑接觸的切面。

2、鱗莖類的切割，一般來講是將新鮮鱗莖片或者鱗莖盤切割成合適的小塊，然后接種在培養(yǎng)基上。如百合是將外層剝開，取出新鮮的鱗片，然后再無菌的條件下切割成1.0-2.0cm2的長方形小塊。一般來講下部的組織比上部的成功幾率要大。大蒜是使用鱗莖盤進行培養(yǎng)，先將鱗莖盤切下，然后將鱗莖盤切成0.5*0.5cm2的小塊。

3、葉片類切割，葉片類一般是將其切割成0.5-1cm2的小塊（可用手術刀切割也可使用打孔器切割），背面朝下接種在培養(yǎng)基上（視品種而定，有些品種正面比背面的效果好）。

4、莖尖類切割，此過程是借助體視顯微鏡來完成的。在顯微鏡下將外層的組織逐層剝離，當一個透亮的半圓球（不同植物，樣子有差異）的頂端分生組織充分暴露出來之后，用解剖刀片將分生組織切下來，為了提高成活率，可帶1-2枚葉原基，然后將其接到培養(yǎng)基上。注意：剝離莖尖時，應盡快接種，莖尖暴露的時間應當越短越好，以防莖尖變干。

（二）、接種

1、平鋪于培養(yǎng)基表面，此方法一般適用于種子、葉片、鱗莖組織等外植體材料。

2、插入培養(yǎng)基，此方法主要針對莖段類外植體，插入培養(yǎng)基時應該注意材料的極性，一定要將極性上的下端插入培養(yǎng)基，切勿弄反！

二、外植體的培養(yǎng)

在接種之后，將外植體放在人工氣候培養(yǎng)箱內進行培養(yǎng)。一般來說，對外植體生長發(fā)育有影響的主要包括溫度、濕度、光照和PH值等培養(yǎng)條件。

（一）、溫度

在植物組織培養(yǎng)中，不同植物繁殖的MAX適溫度不同（百合約為20℃、月季25-27℃、番茄28攝氏度……），在25±2℃的條件下大多植物組織都可以正常生長。低于15℃時，培養(yǎng)的外植體組織生長出現停滯，但高于35℃對生長也不利。促進芽發(fā)生的溫度可略低，如煙草芽形成以18℃MAX合適，12℃以下或33℃以上出芽率均低。有時候高溫處理既可獲得無病毒苗，又影響到器官發(fā)生。如草莓的莖尖分生組織經38℃處理3-5天，提高了無病毒莖尖分生組織的成活率。在一些木本植物，如桃的胚培養(yǎng)中，一定時間的2-5℃低溫處理有利于提高胚的成活率。

（二）、光照

光是組培中的重要環(huán)境條件，它對外植體生長和分化有很大的影響，表現在光照、光質和光周期等方面。

有的材料適合光培養(yǎng)，有的則適合暗培養(yǎng)，如玉簪花芽和花莖的培養(yǎng)，前者愈傷組織的誘導，以暗培養(yǎng)比光培養(yǎng)下的高，而后者則只有暗培養(yǎng)才能誘導出愈傷組織。

光質也影響著外植體愈傷組織的誘導、組織的增殖及其器官分化。如對楊樹愈傷組織的生長，紅光有促進作用，藍光則有阻礙作用。在百合珠芽增殖和分化時發(fā)現，在紅光下8周后不僅產生愈傷組織，同時可以直接分化出苗，11周后所產生的愈傷組織也分化出苗；而在藍光下12周后才出現愈傷組織；白光下則未見愈傷組織的形成，可見紅光能促進生長和分化。與白光和黑暗條件相比，藍光明顯促進綠豆下胚軸愈傷組織的形成。在用白、紅、綠、藍等不同光質培養(yǎng)雙色花葉芋時，發(fā)現不同光質不僅能影響培養(yǎng)物的生物總量，還能影響器官發(fā)生，其中以黃光誘導發(fā)生的頻率MAX高。關于光質對不同種類材料的試管苗增殖和分化的影響不一致，可能與植物組織中的光敏色素和隱花色素有關。

關于光周期對試管苗外植體的增殖和分化，通常都選用一定的光周期來進行外植體的組織培養(yǎng)，如光周期為16h光照、8h黑暗。有人發(fā)現非洲菊的增殖隨光照時間的延長而加快，但超過16h又無作用。在石刁柏的莖尖培養(yǎng)中，根和莖的分化需要每天16h1000Lux照度的光照；而菊芋塊莖培養(yǎng)中，每天12h光照就有利于根的形成。對短日照敏感的葡萄品種，其莖切段的組織培養(yǎng)物只有在短日照條件下才能形成根；反之，對日照長度不敏感的品種則在任何光周期下都能生根。

（三）、培養(yǎng)基的pH值

外植體的培養(yǎng)增殖都要求一定的pH值。通常一般培養(yǎng)基的pH值都在5.6-6.0之間。如果pH值不適則直接影響外植體的營養(yǎng)物質的吸收，進而影響外植體的脫分化、增殖和器官形成。不過pH值對不同植物的影響會有差異，如蘭花宜偏酸些，pH值5.2或更小些。而玉米胚乳愈傷組織在pH值7.0時鮮重增加MAX快，在pH值6.1時干重增長MAX快。

（四）、濕度

組織培養(yǎng)中的濕度影響主要有兩方面：一是培養(yǎng)容器內的濕度，它的濕度條件?？杀ＷC100％；二是培養(yǎng)箱的濕度，控制條件差的實驗室的濕度變化隨季節(jié)而有很大變動，往往是冬天因室內溫度比室外高，結果室內濕度低；而夏天卻因室內溫度比室外低，結果室內濕度高。濕度過高過低都不利于培養(yǎng)物生長。室內濕度過低會造成培養(yǎng)基失水而干枯或滲透壓升高，影響培養(yǎng)物的生長和分化；而過高又會造成雜菌滋長，導致大量污染。因此，我們要求組培室內建議是加裝濕度控制系統(tǒng)人工氣候培養(yǎng)箱內常年保持70％左右的相對濕度。